文章标题：【论著】缺氧-复氧对Ｈ９ｃ２心肌细胞自噬和线粒体缝隙连接蛋白４３的影响及其相互作用

文章作者：李兆康　卢　青　丁世芳
关 键 字：肌细胞，心脏；自噬；缺氧复氧；线粒体Ｃｘ４３
文章摘要：

目的　探究心肌细胞系Ｈ９ｃ２在缺氧-复氧（Ｈ／Ｒ）后自噬与线粒体缝隙连接蛋白４３（Ｃｘ４３）的变化，以及两者间的相互关系。方法　通过缺氧处理１２ｈ、复氧处理１２ｈ建立Ｈ９ｃ２细胞Ｈ／Ｒ 模型。将Ｈ９ｃ２细胞随机分为５组：对照组、Ｈ／Ｒ 组、格尔德霉素（ＧＡ）组、３-甲基腺嘌呤（３-ＭＡ）组、ＧＡ＋３-ＭＡ 组。应用线粒体膜电位检测试剂盒检测各组线粒体膜电位，细胞计数试剂盒（ＣＣＫ-８法）检测各组细胞活力，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测各组Ｂｅｃｌｉｎ-１、ＬＣ３Ｂ、线粒体Ｃｘ４３和磷酸化Ｃｘ４３（ｐ-Ｃｘ４３）的蛋白质水平；应用电子显微镜观察各组自噬体情况。结果　Ｈ／Ｒ 组的细胞活力显著低于对照组（P＜０．０１），乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平显著高于对照组（P＜０．０１），Ｈ-Ｒ 模型建立成功。Ｈ／Ｒ 组的线粒体膜电位、细胞活力均显著低于对照组（P值均＜０．０５）；ＧＡ组、３-ＭＡ 组和ＧＡ＋３-ＭＡ 组的线粒体膜电位、细胞活力为均显著低于Ｈ／Ｒ 组（P值均＜０．０５）；ＧＡ＋３-ＭＡ 组线粒体膜电位、细胞活力均分别显著低于ＧＡ组和３-ＭＡ 组（P值均＜０．０５）。Ｈ／Ｒ 组自噬相关蛋白质Ｂｅｃｌｉｎ-１水平和ＬＣ３ＢⅡ／ＬＣ３ＢⅠ分别为０．８９±０．０５和４．３７±０．５０，均显著高于对照组的０．２６±０．０３ 和０．７７±０．０９（P值均＜０．０５）；与Ｈ／Ｒ 组相比，ＧＡ组、３-ＭＡ 组和ＧＡ＋３-ＭＡ 组的Ｂｅｃｌｉｎ-１水平（０．７５±０．０６、０．４７±０．０３、０．３１±０．０２）、ＬＣ３ＢⅡ／ＬＣ３ＢⅠ（３．２９±０．１８、１．３７±０．０９、０．８５±０．１４）均显著降低（P值均＜０．０５）；ＧＡ＋３ＭＡ 组的Ｂｅｃｌｉｎ-１水平、ＬＣ３ＢⅡ／ＬＣ３ＢⅠ又显著低于ＧＡ和３-ＭＡ 组（P值均＜０．０５）。Ｈ／Ｒ 组线粒体Ｃｘ４３和ｐ-Ｃｘ４３蛋白质水平分别为０．７５±０．０３ 和０．４１±０．０３，均显著低于对照组的０．８６±０．０２ 和０．５８±０．０１（P值均＜０．０５）；ＧＡ 组、３-ＭＡ 组和ＧＡ＋３-ＭＡ 组的线粒体ｐ-Ｃｘ４３ 蛋白质水平分别为０．２７±０．０６、０．３３±０．０５、０．１８±０．０４，均显著低于Ｈ／Ｒ 组（P值均＜０．０５）；ＧＡ组和ＧＡ＋３-ＭＡ 组的线粒体Ｃｘ４３ 蛋白质水平（０．６２±０．０９、０．５９±０．０７）均显著低于Ｈ／Ｒ 组（P值均＜０．０５）；ＧＡ＋３-ＭＡ 组的线粒体ｐ-Ｃｘ４３蛋白质水平显著低于ＧＡ 组和３-ＭＡ 组（P值均＜０．０５）。结论　Ｈ／Ｒ 引起的线粒体Ｃｘ４３含量下降和脱磷酸化增加可能是缺血-再灌注损伤发生的重要机制。自噬参与线粒体Ｃｘ４３磷酸化状态的维持，线粒体Ｃｘ４３特别是ｐ-Ｃｘ４３也参与了自噬的激活过程，对Ｈ／Ｒ 心肌起保护作用。