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慢病毒载体介导RNAi抑制大肠癌细胞HT29的酪氨酸激酶受体（RON）基因的表达
RNAi inhibit RON genes expression in the human colorectal carcinoma HT29 cell mediated by lentiviral vector

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DOI:
作者:
毛联钢，李克强，卓文莹，戴晓宇，余永明，乐东海，冯伟云
Mao liangang，Li keqiang，Zhuo wenying，Dai xiaoyu
作者单位:
1.宁波市第二医院肿瘤分子生物学重点实验室 2.宁波市第二医院肛肠外科
1. Oncomolecularbiology laboratory of Ningbo No.2 hospital 2. Intestinal surgery of Ningbo No.2 hospital
关键词:
RON；HT29细胞；RNAi干扰 ；慢病毒载体
RON; HT29 cell; RNAi; lentiviral vector
摘要:
目的 研究慢病毒介导的RNAi干扰对大肠癌细胞RON基因的干扰效率，构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法 Real-time PCR法检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RON mRNA表达情况，筛选出表达丰度能满足RNAi干扰的大肠癌靶细胞HT29。根据人RON基因序列，构建4种慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-shRNA，转染包装细胞293T，获得4种重组慢病毒pGCSIL/RON-shRNA，分别感染HT29细胞。Real-time PCR法检测各组HT29细胞RON mRNA表达情况，筛选出RNO干扰效率最高的一种shRNA慢病毒载体质粒，构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA。结果 DLD-1，HCT116， RKO，SW480，HT29细胞RON表达丰度能满足RNAi的需要，选择HT29细胞作为RNAi的靶细胞。成功筛选出干扰效率最高的慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-shRNA-4，其干扰效率约为70%。获得长期稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA，RON的mRNA表达量下调了（68±8）%（p<0.01）。结论 慢病毒介导RNAi能显著抑制大肠癌细胞HT29的RON基因的表达，慢病毒载体介导的RNAi是一种高效的“基因沉默”的手段。

 

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