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（重投）抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立和应用

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DOI:
作者:
盛慧明，曹雅楠，孙 兵 ，薛一峰 ，胡志刚
SHENG Huiming, CAO Ya’nan, SUN Bing, XUE Yifeng, HU Zhigang.
作者单位:
上海交通大学医学院附属上海同仁医院检验科，中国人民解放军515医院检验科，南京医科大学附属无锡人民医院检验科
Department of Laboratory Medicine, Shanghai Tongren Hospital affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine， Department of Laboratory Medicine,the people liberation army No.515 hospital, Department of Laboratory Medicine,Wuxi people hospital affiliated to Nanjing Medical University
关键词:
抗心磷脂抗体；双标记免疫检测；时间分辨荧光免疫分析法
摘要:
目的 建立抗心磷脂抗体（ACA）IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析方法（TRFIA）。 方法 以心磷脂抗原（含β2糖蛋白I段）包板，稀土元素Eu3+和Sm3+ 分别标记抗人IgG抗体和抗人IgM抗体，建立双标记TRFIA法并检测510例自身免疫性疾病患者(硬皮病24例、肾病综合征36例、强直性脊柱炎16例、脑梗死117例、狼疮性肾炎33例、干燥综合征63例、系统性红斑狼疮153例、类风湿性关节炎70例)血清和50例健康献血者血清，分析临床阳性率和特异性。评估双标记TRFIA法检测高、中、低值样本的精密度。将3份已知浓度血清标本作倍比稀释，计算回收率。与ELISA方法进行比对，分析比较双标记TRFIA和ELISA的一致相关性和稳定性等，统计学分析采用相关性分析。结果 双标记TRFIA法检测ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体标准曲线的R2分别为0.999、0.993，荧光计数值与样本浓度呈线性相关性。检测高、中、低值样本批内和批间变异系数均＜10.0%，ACA-IgM型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.31%、2.82%、4.14%，批间CV分别为2.29%、4.08%、6.97%；ACA-IgG型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.21%、3.18%、4.61%，批间CV分别为2.26%、3.93%、7.34%。采用双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的灵敏度均为0.1 U/mL，特异度均为98.00%（49/50）。ACA-IgG型抗体回收率最低为95.11%，最高为106.14%；ACA-IgM型抗体回收率最低为96.04%，最高为106.54%。硬皮病、肾病综合征、强直性脊柱炎、脑梗死、狼疮性肾炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎患者ACA-IgG型抗体阳性率依次为16.67%、2.78%、7.14%、3.42%、15.15%、4.76%、7.84%、8.57%，ACA-IgM R2抗体阳性率依次为4.17%、11.11%、14.29%、3.42%、27.27%、3.17%、8.5%、10.0%。ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体与ELISA法均成正相关（R2值分别为0.928、0.924），表明双标记TRFIA法与ELISA法检测结果的一致性较好。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型和ACA-IgG型抗体的荧光计数值分别下降14.7%和15.8%，ELISA法吸光度分别下降37.6%和33.9%，表明TRFIA法试剂盒的稳定性较好。结论 双标记TRFIA同时检测抗心磷脂IgG和IgM型抗体方法具有效率高，灵敏度高，特异性强，检测范围宽以及稳定性好，不仅降低了试剂成本也减少了人工成本，具有较高的临床应用价值，应用前景广阔。

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