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mu阿片受体活化促进胰岛素样生长因子Ⅰ致乳腺癌细胞增殖

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DOI:
作者:
刘 艳 吴 彤 汪晓强 陈雪梅 苏殿三 俞卫锋 田 婕
作者单位:
上海,上海交通大学医学院附属仁济医院麻醉科
关键词:
受体,阿片样,μ;乳腺肿瘤;胰岛素样生长因子Ⅰ;细胞增殖
摘要:
目的 观察mu阿片受体(MOR)在胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF Ⅰ)致人乳腺癌细胞增殖行为中的作用。方法 选取表达MOR的人乳腺癌细胞株MCF-7,采用Western印迹法(n=3)检测IGF Ⅰ刺激对细胞内MOR蛋白表达的影响。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8,n=6)和流式细胞术(n=3)分析外源性MOR激动剂(DAMGO)和特异性MOR拮抗剂甲基纳曲酮(MNTX)对IGF Ⅰ致乳腺癌细胞增殖的影响。采用Western印迹法(n=3)检测MOR不同活化状态下,IGF Ⅰ下游蛋白激酶B(Akt)通路的激活水平。结果 Western印迹法结果显示,以20、100、1000μg/L不同质量浓度IGFⅠ刺激24h,IGFⅠ为20和100μg/L时MOR蛋白的相对表达水平均显著高于对照组(P 值均<0.01),在IGFⅠ质量浓度为100μg/L 时作用最显著。以100μg/LIGF Ⅰ刺激MCF-7细胞15和30min,以及1、6、12 和24h,刺激15 min时MOR 蛋白的表达水平即开始升高,刺激30min和1、6、12、24h时均显著高于对照组(P 值分别<0.05、0.01),在刺激6h时作用达到高峰。流式细胞术检测细胞周期的结果显示,采用100μg/LIGFⅠ刺激MCF-7细胞24h后,处于增殖期的细胞数量显著多于对照组(P<0.01);采用10μmol/LDAMGO预处理2h后再与IGF Ⅰ共同刺激24h,处于增殖期的细胞数量进一步增多,显著高于对照组和IGF Ⅰ单独刺激组(P 值均<0.01);而DAMGO 单独刺激组处于增殖期的细胞数量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8检测细胞活力的结果与细胞周期的检测结果一致。此外,MCF-7单独用1μmol/L MNTX 预处理2h,细胞活力与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);MNTX预处理2h后再与IGFⅠ共同刺激,细胞活力与IGFⅠ单独刺激组相比差异无统计学意义(P>0.05);但在DAMGO与MNTX同时预处理2h后再给予IGF Ⅰ,细胞活力显著低于IGF Ⅰ与DAMGO 联合刺激组(P<0.01)。Western印迹法检测结果显示,采用100μg/LIGFⅠ刺激MCF-7细胞24h后,磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平显著高于对照组(P<0.01);10μmol/LDAMGO预处理2h后再给予100μg/LIGF Ⅰ刺激24h,p-Akt的表达水平显著高于IGF Ⅰ单独刺激组(P<0.01);MCF-7细胞单独用DAMGO 或MNTX预处理2h,p-Akt的表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P 值均>0.05);DAMGO 和MNTX同时预处理2h后再给予IGF Ⅰ,其p-Akt的表达水平显著低于IGF Ⅰ与DAMGO 联合刺激组(P<0.05)。结论 IGFⅠ能够上调人乳腺癌细胞中MOR的表达,活化高表达的MOR能够提高Akt信号通路在IGF Ⅰ作用下的激活水平,促进IGF Ⅰ致MCF-7细胞增殖的作用,该作用可以被MOR特异性拮抗剂所阻断。

 

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