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ISSN:
ISSN0253-9934
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白藜芦醇在调控DsbA-L基因表达中的作用
The role of resveratrol in regulation of DsbA-L gene transcription
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DOI:
作者:
杨文静, 方启晨, 张菁, 任伟, 宋倩倩, 贾伟平
YANG Wenjing, FANG Qichen, ZHANG Jing, REN Wei, SONG Qianqian, JIA Weiping.
作者单位:
苏州大学医学部(杨文静);上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科(方启晨,张菁,任伟,宋倩倩,贾伟平)
Medical College of Suzhou University(YANG Wenjing) Shanghai Jiao Tong University Affiliated Sixth People’s Hospital(FANG Qichen, ZHANG Jing, REN Wei, SONG Qianqian, JIA Weiping)
关键词:
白藜芦醇 ; DsbA-L;启动子 ;Sp1
Resveratrol ; DsbA-L; promoter; Sp1
摘要:
目的 探讨白藜芦醇对DsbA-L基因转录的影响。方法 采用实时荧光定量PCR和Western blot检测3T3-L1细胞和HepG2细胞DsbA-L mRNA和蛋白表达水平。以荧光素酶报告基因实验分析白藜芦醇对DsbA-L基因启动子活性的影响。用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测白藜芦醇对转录因子Sp1与DsbA-L基因内含子1区域Sp1结合位点的结合能力的影响。用Western blot检测Sp1蛋白表达水平。结果 (1)在3T3-L1细胞和HepG2细胞中,白藜芦醇能够上调DsbA-L mRNA和蛋白的表达。(2)白藜芦醇显著增加DsbA-L基因启动子报告基因质粒的荧光素酶活性,而对缺失Sp1结合位点的突变报告基因质粒的荧光素酶活性无显著影响。(3)白藜芦醇显著下调转录因子Sp1的表达,使Sp1与DsbA-L基因内含子区DNA的特异结合降低。结论 白藜芦醇通过抑制Sp1表达,上调DsbA-L基因的转录从而促进DsbA-L蛋白的表达。
Objective To explore the potential mechanism of resveratrol-induced upregulation of the DsbA-L gene. Methods The DsbA-L mRNA and protein levels were detected by real time quantitative PCR and Western blot, respectively. The promoter activity of DsbA-L gene was detected by Dual Luciferase Reporter Assay System. The effect of resveratrol on the binding activity of transcription factor Sp1 to the DsbA-L intronic sequence was analyzed by electrophoretic mobility shift assay(EMSA). The effect of resveratrol on the expression of Sp1 was determined by Western blot. Results Resveratrol increased the expression of mRNA and protein of DsbA-L in both 3T3-L1 cells and HepG2 cells. The luciferase activity of p(-186 to +432)Luc, the plasmid containing DsbA-L promoter and intron1 region encompassing a Sp1-binding site, was significantly increased by treated with resveratrol, whereas resveratrol had no effect on the luciferase activity of the reporter plasmids, which did not contain the Sp1 site. Furthermore, resveratrol reduced the binding of transcription factor Sp1 to the Sp1-binding site of DsbA-L, as well as the protein level of Sp1. Conclusions Resveratrol may increase the expression of DsbA-L gene via repression the expression of Sp1.
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