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ISSN:
ISSN0253-9934
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Akt-YAP信号通路在谷氨酰胺饥饿诱导Hela细胞凋亡过程中的作用研究
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DOI:
作者:
齐梦迭,伍兰,王学敏
QI Mengdie, WU Lan, WANG Xuemin
作者单位:
苏州大学研究生部,上海交通大学附属第六人民医院
Department of postgraduate, Soochow University; Department of Anesthesiology / ICU, Shanghai Sixth People’s Hospital, Shanghai Jiaotong University
关键词:
谷氨酰胺;凋亡;蛋白激酶B;Yes相关蛋白
Glutamine; Apoptosis; Protein kinase B; Yes-associated protein
摘要:
【摘要】 目的 研究谷氨酰胺(Gln)对Hela细胞凋亡的影响,探讨该作用与蛋白激酶B(Akt)-Yes相关蛋白(YAP)信号传导通路的关系。 方法 用含不同浓度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0 mM)的DMEM培养基分别培养Hela细胞24 h,CCK-8检测细胞活性;用含Gln 4 mM、Gln 0 mM或Gln 4 mM + Akt抑制剂LY294002 40μM的DMEM培养基分别培养Hela细胞24 h,Western blot检测Bax、pAkt、pYAP蛋白的表达;利用siRNA抑制Hela细胞YAP的表达,用含Gln 4 mM或0 mM的DMEM培养基分别培养正常细胞或转染后的细胞24 h,Western blot检测Bax蛋白的表达。 结果 细胞培养24 h后,低浓度Gln组细胞活性明显下降(P<0.05);与Gln 4 mM组相比,Gln 0 mM组Bax表达增加;与Gln 4 mM组相比,Gln 0 mM组和Gln 4 mM + LY294002组Akt、YAP磷酸化水平降低,Bax表达增加;Gln 0 mM培养正常细胞24 h后Bax表达增加,而YAP siRNA转染的细胞Bax的表达降低。 结论Gln饥饿可诱导Hela细胞凋亡,其机制与Akt-YAP信号传导通路有关。
【Abstract】 Objective To investigate the effect of glutamine on apoptosis in Hela cells, and to explore the relationship between the role and the protein kinase B (Akt)-Yes-associated protein (YAP) signaling pathway. Methods Hela cells were cultured in DMEM medium with different concentrations of Gln (4, 2, 1, 0.5, 0.1, 0 mM) for 24 hours, cell viability was measured. Hela cells were cultured in DMEM medium with Gln 4 mM, Gln 0 mM or Gln 4 mM + Akt inhibitor LY294002 40μM for 24 hours, Western blot was used to detect the expression of Bax, pAkt and pYAP. Using siRNA to suppress YAP expression, normal cells and transfected cells were cultured in DMEM medium with Gln 0 mM for 24 hours, Bax expression was measured. Results After 24 hours incubation, cell viability decreased with the reduction of Gln concentrations (P <0.05). Compared with Gln 4 mM group, Bax expression increased in Gln 0 mM group; Akt and YAP phosphorylation levels decreased, Bax expression increased in Gln 0 mM and Gln 4 mM + LY294002 groups. Bax expression increased in Gln-free normal cells after incubation for 24 hours, while it reduced in YAP siRNA transfected cells. Conclusion Akt-YAP signaling pathway contributed to Gln starvation-mediated apoptosis in Hela cells.
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